Resumo

(Objetivo)  O Tryapanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas, é um parasita que apresenta uma alternância em seu ciclo de vida entre um hospedeiro invertebrado triatomíneo) e um vertebrado(mamífero). Vários estudos demonstraram que, no T. cruzi, a HSP83 (homóloga da HSP90) é essencial para a divisão celular e o controle da resposta ao estresse térmico. Esta pesquisa concentrou-se no estudo da clonagem, caracterização bioinformática e expressão do gene da proteína de choque térmico HSP83 do T. cruzi para estudos adicionais de sinalização.

(Metodologia)  O RNA foi extraído de epimastigotas de T. cruzi (clone EPm6/MOHM/VE/2007/ 6c) usando um kit comercial. O cDNA que codifica a HSP83 foi obtido por meio de RT-PCR a partir do mRNA extraído, para o qual os primers foram projetados com base na sequência da HSP83 da cepa T. cruzi CL Brener. A clonagem foi realizada com o pGEM®T-Easy e subclonada no vetor de expressão pQE30. Foi realizada a caracterização bioinformática e de sequência. O gene foi expresso e a proteína recombinante foi purificada por cromatografia de afinidade e identificada por imunotransferência.

(Resultados)  A análise da sequência mostrou similaridade com o gene HSP83 do Trypanosoma cruzi e os domínios HSP, bem como os epítopos B, foram observados na sequência. Após 3 horas de indução com IPTG, foi obtida uma proteína recombinante com peso aproximado de 83 kDa. A imunotransferência com soro hiperimune antiepimastigota de T. cruzi permitiu a detecção de uma única banda com peso molecular de aproximadamente 83 kDa.

(Conclusões)  Todos os resultados indicam que a clonagem e a caracterização da HSP83 do Trypanosoma cruzi foram alcançadas.

Palavras-chave: Trypanosoma cruzi; proteína de choque térmico; HSP83; clonagem; expressão