Resumen

(Objetivo)  Tryapanosoma cruzi, un agente causal de la enfermedad de Chagas, es un parásito que presenta una alternancia en su ciclo de vida entre un hospedador invertebrado (triatomino) y uno vertebrado (mamífero). Varios estudios han demostrado que en T. cruzi, HSP83 (homólogo de HSP90) es esencial para la división celular y el control de la respuesta al estrés térmico. Esta investigación se concentró en el estudio de la clonación, la caracterización bioinformática y la expresión del gen de la proteína de choque térmico HSP83 de T. cruzi para estudios posteriores sobre señalización.

(Metodología)  El ARN fue extraído de epimagostigotes T. cruci (clon EPm6/MOHM/VE/2007/ 6c), utilizando un kit comercial. El ADNc que codifica HSP83 se obtuvo utilizando RT-PCR, a partir del ARNm extraído, para lo cual se diseñaron los cebadores con base en la secuencia HSP83 de la cepa T. cruzi CL Brener. La clonación se realizó usando pGEM®T-Easy y se subclonó en el vector de expresión pQE30. Se efectuó la caracterización bioinformática y de secuencias. El gen se expresó y la proteína recombinante se purificó por cromatografía de afinidad, igual que se identificó por inmunotransferencia.

(Resultados)   El análisis de secuencia mostró similitud con el gen HSP83 de Trypanosoma cruzi y se observaron dominios HSP, así como epítopos B en la secuencia. Después de 3 horas de inducción con IPTG, se obtuvo una proteína recombinante con un peso aproximado de 83 kDa. La reacción de inmunotransferencia con suero hiperinmune anti-epimastigote de T. cruzi permitió la detección de una sola banda con un peso molecular de aproximadamente 83 kDa.

(Conclusiones)  Todos los resultados indican que se logró la clonación y caracterización de HSP83 de Trypanosoma cruzi.

Keywords: Trypanosoma cruzi; proteína de choque térmico; HSP83; clonación; expresión