Cien cariotipos fetales acreditados en Costa Rica, años 2009 y 2010Resúmenes
<span name="style_bold">Objetivo: </span>La identificación de cromosomopatía fetal es un factor importante para el mejor manejo perinatal y pediátrico en los embarazos de alto riesgo. El objetivo de esta publicación es mostrar al personal de salud, los resultados de nuestros ensayos de cariotipo en líquido amniótico, obtenidos desde el momento en que han sido acreditados por el Ente Costarricense de Acreditación y compararlos con los estándares internacionales. <span name="style_bold">Métodos: </span>Se realizó cultivo abierto de 100 muestras recibidas desde enero del 2009 hasta diciembre 2010, provenientes de hospitales de la seguridad social y de servicios de salud privados y la cosecha de los “amniocitos” mediante suspensión enzimática. La indicación de amniocentesis en el 65% de los casos fue por ecografía anormal y el 28% de las veces por edad materna avanzada. <span name="style_bold">Resultados: </span>La cromosomopatía fetal encontrada fue de 35%. Para muestras en cantidad y calidad aceptables, el éxito de los cultivos fue 100% y el tiempo de respuesta fue de 13 días promedio. Estos datos concuerdan con las normas internacionales en esta materia. Además, anualmente participamos satisfactoriamente en rondas de evaluación externa de la calidad organizados por la Cytogenetic European Quality Assessment. <span name="style_bold">Conclusión: </span>En Costa Rica contamos con servicios de perinatología con equipos ecográficos muy sofisticados y con personal altamente especializado, de manera que los defectos anatómicos fetales y otras patologías rara vez pasan desapercibidas. El cariotipo fetal es el complemento indispensable para el abordaje clínico óptimo de estos casos, sobre todo, cuando se cuenta con la calidad que garantizan los ensayos acreditados.En Costa Rica contamos con servicios de perinatología con equipos ecográficos muy sofisticados y con personal altamente especializado, de manera que los defectos anatómicos fetales y otras patologías rara vez pasan desapercibidas. El cariotipo fetal es el complemento indispensable para el abordaje clínico óptimo de estos casos, sobre todo, cuando se cuenta con la calidad que garantizan los ensayos acreditados.
acreditación; diagnóstico prenatal; citogenética; amniocentesis; Costa Rica
<span name="style_bold">Aims: </span>The identification of fetal abnormal chromosomes in high risk pregnancies, allows proper pediatric and obstetric management of the cases as well as genetic counseling. The results of 100 genetic amniocentesis from January 2009 to December 2010, since the accreditation of these laboratory tests, are reported. <span name="style_bold">Methods: </span>Amniocentesis were performed in hospitals of the social security system and in private facilities. There were two main reasons for referral: abnormal ultrasound assessment (65% of cases) and advanced maternal age (28%). Fetal cells were flask open cultured and suspension harvested. <span name="style_bold">Results: </span>Abnormal fetal karyotypes were 35%. Success rate for samples of acceptable quality was 100%. Turn around time was 13 days average. This data is in accordance with American and European requirements for quality and competence. The laboratory also participates annually in Cytogenetic European Quality Assessment rounds with achievements of satisfactory performance. <span name="style_bold">Conclusion: </span>In Costa Rica we have skilled and experienced perinatologists as well as highly sophisticated ultrasonographic equipment, so that many fetal and pregnancy abnormalities are routinely detected. In these cases, the fetal karyotype of guaranteed quality is a very useful tool in their adequate clinical management.In Costa Rica we have skilled and experienced perinatologists as well as highly sophisticated ultrasonographic equipment, so that many fetal and pregnancy abnormalities are routinely detected. In these cases, the fetal karyotype of guaranteed quality is a very useful tool in their adequate clinical management.
accreditation; prenatal diagnosis; cytogenetics; amniocentesis; Costa Rica
<b>Aims: </b>The identification of fetal abnormal chromosomes in high risk pregnancies, allows proper pediatric and obstetric management of the cases as well as genetic counseling. The results of 100 genetic amniocentesis from January 2009 to December 2010, since the accreditation of these laboratory tests, are reported. <b>Methods: </b>Amniocentesis were performed in hospitals of the social security system and in private facilities. There were two main reasons for referral: abnormal ultrasound assessment (65% of cases) and advanced maternal age (28%). Fetal cells were flask open cultured and suspension harvested. <b>Results: </b>Abnormal fetal karyotypes were 35%. Success rate for samples of acceptable quality was 100%. Turn around time was 13 days average. This data is in accordance with American and European requirements for quality and competence. The laboratory also participates annually in Cytogenetic European Quality Assessment rounds with achievements of satisfactory performance. <b>Conclusion: </b>In Costa Rica we have skilled and experienced perinatologists as well as highly sophisticated ultrasonographic equipment, so that many fetal and pregnancy abnormalities are routinely detected. In these cases, the fetal karyotype of guaranteed quality is a very useful tool in their adequate clinical management.
accreditation; prenatal diagnosis; cytogenetics; amniocentesis; Costa Rica
Original
Cien cariotipos fetales acreditados en Costa Rica, años 2009 y 2010
(One Hundred Accredited Fetal Karyotypes in Costa Rica durng 2009 and 2010)Isabel Castro-Volio, Fernando Ortiz-Morales, Luisa Valle-Bourrouet.
*Correspondencia
Resumen
Objetivo: La identificación de cromosomopatía fetal es un factor importante para el mejor manejo perinatal y pediátrico en los embarazos de alto riesgo. El objetivo de esta publicación es mostrar al personal de salud, los resultados de nuestros ensayos de cariotipo en líquido amniótico, obtenidos desde el momento en que han sido acreditados por el Ente Costarricense de Acreditación y compararlos con los estándares internacionales.
Métodos: Se realizó cultivo abierto de 100 muestras recibidas desde enero del 2009 hasta diciembre 2010, provenientes de hospitales de la seguridad social y de servicios de salud privados y la cosecha de los “amniocitos” mediante suspensión enzimática. La indicación de amniocentesis en el 65% de los casos fue por ecografía anormal y el 28% de las veces por edad materna avanzada.
Resultados: La cromosomopatía fetal encontrada fue de 35%. Para muestras en cantidad y calidad aceptables, el éxito de los cultivos fue 100% y el tiempo de respuesta fue de 13 días promedio. Estos datos concuerdan con las normas internacionales en esta materia. Además, anualmente participamos satisfactoriamente en rondas de evaluación externa de la calidad organizados por la Cytogenetic European Quality Assessment.
Conclusión: En Costa Rica contamos con servicios de perinatología con equipos ecográficos muy sofisticados y con personal altamente especializado, de manera que los defectos anatómicos fetales y otras patologías rara vez pasan desapercibidas. El cariotipo fetal es el complemento indispensable para el abordaje clínico óptimo de estos casos, sobre todo, cuando se cuenta con la calidad que garantizan los ensayos acreditados.
Descriptores: acreditación, diagnóstico prenatal, citogenética, amniocentesis, Costa Rica.
Abstract
Aims: The identification of fetal abnormal chromosomes in high risk pregnancies, allows proper pediatric and obstetric management of the cases as well as genetic counseling. The results of 100 genetic amniocentesis from January 2009 to December 2010, since the accreditation of these laboratory tests, are reported.
Methods: Amniocentesis were performed in hospitals of the social security system and in private facilities. There were two main reasons for referral: abnormal ultrasound assessment (65% of cases) and advanced maternal age (28%). Fetal cells were flask open cultured and suspension harvested.
Results: Abnormal fetal karyotypes were 35%. Success rate for samples of acceptable quality was 100%. Turn around time was 13 days average. This data is in accordance with American and European requirements for quality and competence. The laboratory also participates annually in Cytogenetic European Quality Assessment rounds with achievements of satisfactory performance.
Conclusion: In Costa Rica we have skilled and experienced perinatologists as well as highly sophisticated ultrasonographic equipment, so that many fetal and pregnancy abnormalities are routinely detected. In these cases, the fetal karyotype of guaranteed quality is a very useful tool in their adequate clinical management.
Keywords: accreditation, prenatal diagnosis, cytogenetics, amniocentesis, Costa Rica
Desde hace 40 años, el diagnóstico fetal citogenético se considera un procedimiento de rutina, en la atención prenatal de los embarazos de alto riesgo genético, en los países desarrollados. Las metas del diagnóstico prenatal son a) la detección de anomalías fetales incompatibles con la vida o discapacitantes, para preparar a los padres para recibir de la mejor manera a un bebé afectado, o para ofrecer la opción de aborto (en los países donde esto es legalmente posible), b) la identificación de condiciones que pueden influenciar el momento, el lugar y el tipo de parto más apropiados para minimizar el daño al producto, c) la individualización de los fetos que se pueden ver beneficiados de la intervención pediátrica temprana y d) la identificación de los fetos que se pueden beneficiar del tratamiento in utero.
En Costa Rica, específicamente en el INISA, tenemos 24 años de experiencia con diagnósticos cromosómicos fetales, obtenidos a partir de muestras de líquido amniótico y 18 años ensayando muestras de sangre fetal obtenidas mediante cordocentesis, con el fin de obtener el cariotipo1. Trabajamos habitualmente con los hospitales R. A. Calderón Guardia y México, ocasionalmente con los hospitales Max Peralta Jiménez, Hospital de las Mujeres Adolfo Carit y Dr. Tony Facio Castro. Además recibimos muestras biológicas de diversos hospitales privados, clínicas y consultorios particulares.
Nuestros ensayos diagnósticos se encuentran dentro del alcance de nuestro Sistema de Gestión de la Calidad y están acreditados a partir del 09 de diciembre del 2008, de conformidad con los requisitos de la Norma INTE-ISO/IEC 17025:2005 “Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y calibración”. La acreditación es un proceso mediante el cual una tercera parte autorizada otorga el reconocimiento formal de la competencia técnica de una entidad (en nuestro caso de un laboratorio de ensayo) para la realización de una actividad determinada y perfectamente definida. Es el mecanismo que proporciona la confianza necesaria en los certificados, informes de inspección, actas de ensayo, certificados de calibración y validaciones medioambientales emitidos por las entidades de certificación de diferentes países.2La vigencia de la acreditación de nuestros ensayos es por tiempo indefinido y está sujeta a las evaluaciones anuales de seguimiento y reevaluación cada 4 años hasta un máximo de 4 años y tres meses, según lo establecido por los procedimientos de evaluación y acreditación del Ente Costarricense de Acreditación (ver alcance de acreditación número LE-059 en la página web del Ente Costarricense de Acreditación).
El trabajar bajo un sistema de gestión, aseguramiento y mejora continua de la calidad confiere muchas ventajas al usuario de nuestros servicios diagnósticos, entre otras, la confianza en que se van a satisfacer todas sus necesidades en esta materia. Nuestra política de calidad dice así: “La Alta Dirección del INISA se compromete a garantizar que los ensayos que forman parte del Sistema de Gestión de la Calidad se realizan apegándose a las buenas prácticas de laboratorio, empleando metodologías de ensayo confiables y reproducibles, utilizando en todo momento equipo y material de calidad comprobada, así como asegurando la idoneidad de todo su personal, requiriendo que el personal clave se familiarice con la documentación de la calidad y brindándole entrenamiento, capacitación y actualización en los temas de su competencia, para garantizar que los resultados obtenidos son válidos y fiables. Se compromete además a mantener el Sistema de Gestión de la Calidad en un proceso de mejora continua. Por lo tanto, se compromete a seguir los lineamientos de la Norma INTE-ISO/IEC 17025:2005 “Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo y/o calibración” y los de la norma INTE/ISO 15189:2008 “Laboratorios de análisis clínicos – requisitos particulares para la calidad y la competencia” y a cumplir con los requisitos legales que le permiten y obligan a prestar servicios de calidad a sus clientes”.
El objetivo de esta publicación es mostrar al personal de salud, los resultados de nuestros ensayos de cariotipo en líquido amniótico, obtenidos desde el momento en que han sido acreditados y compararlos con los estándares internacionales.
Materiales y métodos
En el transcurso de los años 2009 y 2010 recibimos 100 muestras de líquido amniótico recolectadas en los hospitales México (n = 33), Calderón Guardia (n = 29), Max Peralta (n = 12), Enrique Baltodano (n = 1) y sector privado (n = 25). La amniocentesis para realizar el cariotipo fetal es un procedimiento voluntario, al cual las pacientes consienten de manera oral. Las indicaciones para realizar las amniocentesis fueron: la ecografía mostró algún tipo de malformación fetal (n = 33), edad de la embarazada igual o mayor que 35 años (n = 28), higroma quístico fetal (n = 11), presencia de marcadores sonográficos de aneuploidía fetal (n = 7), hidropesía fetal (n = 6), oligohidramnios o polihidramnios (n = 4), tamizaje positivo con marcadores séricos (n = 2) y 9 casos de indicaciones menos frecuentes. La edad gestacional calculada mediante ecografía se informó para todas las amniocentesis excepto una, la más temprana se realizó en la semana 14 y la más tardía en la semana 37 de gestación. Hasta la semana 20 inclusive se tomaron 54 muestras de líquido amniótico, después de lavigésima semana lacifra fue de 46 amniocentesis. Todas las muestras que recibimos en el laboratorio fueron satisfactorias en cantidad y calidad excepto en seis casos: dos muestras provenían de fluidos de productos obitados, otras dos eran de edades gestacionales muy avanzadas y las siguientes dos muestras eran muy escasas. De todas maneras, el laboratorio no rechaza ninguna muestra y todas se ingresan a la fase analítica. Los cultivos de “amniocitos” se realizaron en frascos T25, en incubadoras de CO2 y fueron cosechados mediante suspensión enzimática. Las preparaciones cromosómicas se bandearon con bandas G, a un nivel de resolución de entre 400 y 550 bandas, según el caso, y se analizaron células provenientes de al menos dos cultivos independientes, excepto en los casos en que el cariotipo fetal resultó ser masculino normal, en los cuales basta con el análisis de las células de un solo frasco T25. Se tomaron al menos dos fotografías por cada caso.
Resultados
Todos los cultivos fueron exitosos, excepto en tres casos no hubo crecimiento celular: un líquido de 35 semanas, otro líquido color casi negro de un producto obitado y otro caso de escaso líquido proveniente del hidrotórax de otro producto obitado. Por lo tanto, el éxito del cultivo fue de 100% para las muestras de calidad y en cantidad aceptables. El cariotipo fetal se obtuvo en todas las 97 muestras que crecieron, en 30 casos fue femenino normal, en 33 casos fue masculino normal, y fue anormal en 34 estudios. Las características de los cariotipos fetales anormales se muestran en el Cuadro 1.
Para las 94 muestras que cumplieron los requisitos de calidad del laboratorio, los tiempos de respuesta (en días naturales, desde que la muestra ingresa al laboratorio hasta que se emite el informe final) oscilaron entre los 9 días (8 casos) hasta los 35 días (un caso). El tiempo de respuesta promedio fue de 13 días.
Discusión
Los estándares europeos exigen un mínimo de 98% de cultivos exitosos en muestras de buena calidad3y el Colegio Americano de Genética Humana admite un mínimo de 99 % de éxito4lo mismo que la Asociación de Citogenetistas Clínicos (inglesa)5La Asociación de Citogenetistas Clínicos propone que el resultado en el 95% de los casos debe estar listo dentro de 14 días calendario,5el estándar europeo es de 21 días para el 90% de las muestras3y el del Colegio Americano de Genética Médica es de 14 días para el 90% de los casos,4a menos que sea necesario hacer estudios adicionales.
El laboratorio de citogenética cumple en todo su alcance con los estándares y lineamientos internacionales en materia de calidad, no solamente en lo concerniente al tiempo de respuesta y al éxito de los cultivos, sino también en cuanto a todos los procesos pre-analíticos, analíticos y post-analíticos. Por ejemplo, el nivel de bandeo necesario de acuerdo con la indicación para realizar el estudio, los requerimientos del análisis citogenético en el caso de los cultivos cosechados mediante suspensión enzimática, los niveles de análisis básico, moderado o extensivo en el caso de posible mosaicismo, etc. Además participamos satisfactoriamente en rondas de evaluación externa de la calidad tipo ensayos de aptitud organizados por CEQA (Cytogenetic European Quality Assessment).
En cuanto a la cromosomopatía fetal (Cuadro 1), vemos como el común denominador es la indicación de ecografía anormal o la edad materna avanzada junto con marcadores sonográficos sugestivos de anomalía cromosómica. Solamente en un caso el hallazgo de translucencia nucal aumentada, como única indicación de amniocentesis permitió hacer el diagnóstico de trisomía 21. En esta situación atípica, no se trató de una trisomía 21 libre, con 47 cromosomas, sino de una trisomía por reordenamiento desbalanceado, con 46 cromosomas. El rea (21q21q) es el tipo más común de reordenamientos de novo en el síndrome de Down.6El análisis citogenético convencional no permite distinguir, si este defecto corresponde con una translocación robertsoniana o con un isocromosoma. Cuando se hacen estudios moleculares de estos reordenamientos, la mayoría de las veces resultan ser isocromosomas derivados de un único cromosoma 21 parental que sufre un intercambio tipo U entre cromátidas hermanas.6-8Otro isocromosoma diagnosticado prenatalmente fue el del cromosoma 18, que produjo una trisomía 18 con 46 cromosomas. Este caso fue confirmado mediante QF-PCR en nuestro laboratorio, pues esta técnica la tenemos validada desde el 2008 para las trisomías 21, 18 y 13.9Un tercer isocromosoma para el brazo largo del cromosoma X, es un hallazgo relativamente frecuente en los casos de síndrome de Turner en mosaico con una línea celular 45, X típica. Otros casos interesantes fueron los que presentaron cromosomas extra estructuralmente anormales, también llamados marcadores, supernumerarios, accesorios y cromosomas B. Algunos son inocuos y no tienen consecuencias fenotípicas (los cromosomas B) pero otros pueden significar un riesgo para el feto. Se diagnostican en 1:1000 diagnósticos prenatales, a menudo como mosaicos con una línea celular normal.10Más de la mitad de las veces tienen origen en un cromosoma acrocéntrico, el cual con frecuencia resulta ser un cromosoma 15. El caso con un marcador y ascitis fetal severa mostró un cromosoma metacéntrico extra muy pequeño y el feto polimalformado presentó dos marcadores idénticos, acrocéntricos con satélites. Por otro lado, las translocaciones recíprocas balanceadas, ya sea maternas o paternas, son comunes (1:500 personas portadoras) y casi siempre simples, involucran usualmente solo dos cromosomas, por lo general autosomas y cada uno tiene solamente un punto de fractura. El padre o la madre portadora tienen aumento del riesgo de concebir un producto físicamente y mentalmente anormal, debido al fenómeno de aneusomía segmental.11Por ejemplo, en nuestro caso de madre con translocación (4,7) se produjo un desbalance tipo adyacente 1 que presenta un segmento trisómico para la porción del cromosoma 4 (q31.1→qter) y otro segmento monosómico para 7 (q35→qter). El riesgo de producto anormal (en cualquier embarazo) para la madre con esta translocación es de 18,40% y el mismo es potenciable viable.
El laboratorio de citogenética siempre solicita sangre para hacer el cariotipo del padre y de la madre del feto con cromosomopatía, a menos de que se trate de trisomías libres o monosomía X. Sin embargo, no siempre conseguimos que los hospitales nos envíen las muestras o nos refieran a estas personas, de manera que a veces el estudio del caso se queda incompleto. Esto tiene repercusiones para futuros embarazos, ya que para el asesoramiento genético apropiado de estas familias, es necesario contar con la infomación completa en todos los casos. De igual manera, solicitamos que se nos informe de cualquier discrepancia entre el cariotipo fetal que el laboratorio ha reportado y el fenotipo del recién nacido, incluso en varias ocasiones solicitamos sangre neonatal para hacer control interno de calidad. Lamentablemente no hemos recibido retroalimentación de ningún servicio de salud en este sentido, sin embargo, en las encuestas de satisfacción del cliente que realizamos anualmente, el laboratorio obtiene muy buenos resultados.
En Costa Rica contamos con servicios de perinatología con equipos ecográficos muy sofisticados y con personal altamente especializado, de manera que los defectos anatómicos fetales y otras patologías rara vez pasan desapercibidas. El cariotipo fetal es el complemento indispensable para el abordaje clínico óptimo de estos casos, sobre todo, cuando se cuenta con la calidad que garantizan los ensayos acreditados.
Referencias
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*Correspondencia: Isabel Castro-Volio
Correo electrónico:isabel.castro@ucr.ac.cr,
Fuentes de apoyo:Proyecto de cooperación para la acreditación (PROCOA), Vicerrectoría de Investigación y Rectoría de la Universidad de Costa Rica.
Original
One Hundred Accredited Fetal Karyotypes in Costa Rica During 2009 and 2010
( Cien cariotipos fetales acreditados en Costa Rica, años 2009 y 2010 )
Isabel Castro-Volio, Fernando Ortiz-Morales, Luisa Valle Bourrouet
*Correspondence
Abstract
Objective: Identification of fetal chromosomal abnormalities is an important factor for improving perinatology and pediatric management in high risk pregnancies. The aim for this publication is to show healthcare providers, the results from our clinical research in amniotic fluid karyotype tests, obtained since they were accredited by the costarican accreditation entity, and to compare them with international standards.
Methods: Flask open cultures were conducted on 100 samples, received from January 2009 to December 2010, from social security hospitals and private health facilities and the harvest of "amniocytes" by enzyme suspension. The reasons for referral were: an abnormal ultrasound in 65% of cases, and 28% because of advanced maternal age.
Results: Fetal chromosomal disorders were found in 35%. For acceptable quantity and quality samples, a 100% culture success was obtained, with a mean 13 days response time. These data are consistent with international standards. Besides, we satisfactorily participate in annual external quality evaluations by the Cytogenetic European Quality Assessment.
Conclusion: In Costa Rica, there are perinatology services equipped with sophisticated ultrasound hardware and highly specialized personnel, so that fetal anatomical defects and other disorders rarely go unnoticed. Fetal karyotype is an essential complement for optimal clinical management of these cases, mostly when quality-guaranteed clinical trials are available.
Keywords: accreditation, prenatal diagnosis, cytogenetics, amniocentesis, Costa Rica.
For the past 40 years, in developed countries, cytogenetic fetal diagnosis is considered a routine procedure, for prenatal care of pregnancies at high genetic risk. The aims of prenatal diagnosis are a) the detection of incompatible with life or disabling fetal abnormalities, to prepare parents for the best way to receive an affected child, or to offer the option of abortion (in countries where this is legally available), b) identification of conditions that can influence the most appropriate time, place and mode of delivery to minimize fetal damage, c) the identification of fetuses that could benefit from early pediatric intervention d ) the identification of fetuses that may benefit from in utero treatment.
In Costa Rica, specifically at INISA, we´ve achieved a 24 year experience with chromosomal fetal diagnoses obtained from amniotic fluid samples, and 18 years testing blood samples from cordocentesis, to obtain the karyotype.1 We usually work with Hospitals: "R.A. Calderón Guardia" and "México", occasionally with Hospitals: "Max Peralta Jiménez", "Hospital de las Mujeres Adolfo Carit" and "Dr. Tony Facio Castro". Besides, we receive biologic samples from several private hospitals, clinics and private practice offices.
Our diagnostic tests are within the scope of our Quality Assessment System, and are also accredited as of December 9th, 2008, in accordance with Standard INTE-ISO/IEC 17025:2005 requirements "General requirements for the competition of testing and calibration laboratories". The accreditation is a process in which an authorized third party gives formal recognition of an entitys technical capability (in our case a testing laboratory) for developing a specific and perfectly defined activity. It is the mechanism that provides the necessary trust in certificates, inspection reports, test reports, calibration certificates and environmental validations issued by certification entities from different countries.2 The accreditation of our tests is for an indefinite period and is subject to annual monitoring assessments and reassessment every 4 years to a maximum of 4 years and three months, according to the evaluation and accreditation procedures of the Costarican Accreditation Entity (see accreditation scope number LE-059 on the Costarican Accreditation Entitys webpage.
Working on a management, assurance and continuous quality improvement system gives a lot of advantages to those using our diagnostic services, among others, trusting that all of their needs will be met for this subject. Our quality policy says: INISAs Senior Management is committed to ensure that tests that are part of the Quality Management System are performed sticking to good laboratory practices, using reliable and reproducible test methodologies, always using proven quality equipment and materials, as ensuring all of its suitability, requiring that key personnel gets to know quality documentation and providing training and update on matters within its competence, to guarantee valid and trustable results. It is also committed to maintain the Quality Management System on a continuous improving process. Therefore, it is committed to follow guidelines from Standard INTE-ISO/IEC 17025:2005 "General requirements for the competition of testing and/or calibration laboratories" and those from Standard INTE/ISO 15189:2008 "Clinical analysis laboratories particular requirements for quality and competition" and to fulfill legal requirements which allow and force to give quality services to its clients".
The goal for this publication is to show healthcare personnel, our results from amniotic fluid karyotype tests, obtained from the moment they were accredited and to compare them with international standards.
Materials and methods
During 2009 and 2010 we received 100 amniotic fluid samples collected from Hospitals: "México (n= 33), Calderón Guardia (n= 29), Max Peralta (n= 12), Enrique Baltodano (n= 1) and private practice facilities (n= 25). Amniocentesis to perform the fetal karyotype is a voluntary procedure, which patients orally consent. Indications to perform amniocentesis were: some type of fetal malformation shown on the ultrasound (n= 33), pregnant woman 35 years or older (n=28), fetal cystic hygroma (n=11), presence of ultrasound markers for fetal aneuploidy (n=7), fetal hydrops (n=6), oligohydramnios or polyhydramnios (n=4), positive serum marker screening (n=2) and 9 cases for less frequent indications. Ultrasound-calculated gestational age was informed for all of the amniocentesis except for one, the earliest was performed at gestational week 14, and the latest at gestational age 37. Until week 20 inclusive, 54 amniotic fluid samples were taken, after the twentieth gestational week 46 amniocentesis were performed. All samples received were satisfactory in quantity and quality except for six cases: two samples came from dead fetuses, other two samples were from fetuses with too advanced gestational ages and the other two samples were too low. Anyway, the laboratory does not reject any sample and they all enter the analytic phase. Amniocyte cultures were performed in T25 flasks, in CO2 incubators and were harvested by enzyme suspension. Banding of chromosomal preparations was made with G bands, at a resolution level between 400 and 550 bands, according to the case, and cells from at least two independent cultures were analyzed, except for cases in which the fetal karyotype resulted to be a normal male, in which the analysis from just one T25 flask was enough. At least two photographs were taken for each case.
Results
All cultures were successful, except for three cases in which there was no cell growth: a 35 weeks amniotic fluid, an (almost black) amniotic fluid from a dead fetus and another case of low fluid from a dead fetus´ hydrothorax. Therefore, culture´s success was of 100% for acceptable quality and quantity samples. Fetal karyotype was obtained in all the 97 grown samples, 30 cases were normal females, 33 cases were normal males, and there were 34 abnormal results. Characteristics from abnormal fetal karyotypes are shown in Table 1. For the 94 samples that met laboratory quality standards, response times (reported as days from the moment the sample entered the laboratory until the final report was issued) ranged between 9 days (8 cases) to 35 days (one case). Average response time was 13 days.
Discussion
European standards demand a minimum of 98% successful cultures for quality samples3 and the American College of Medical Genetics accepts a minimum of 99% success4, the same as the Association for Clinical Cytogenetics. The Association for Clinical proposes that 95% of case results should be ready within 14 calendar days,5 European standard is 21 days for 90% of samples3 and the American College of Medical Genetics says 14 days for 90% of cases,4 unless further studies are needed.
The cytogenetics laboratory fulfills international standards and guidelines in quality matters, not only regarding to time response and culture success, but also regarding to pre-analytic, analytic and post-analytic processes. For example, the necessary banding level according to the indication for the test, the cytogenetic analysis requirements for cultures harvested by enzyme suspension, the basic, moderate or extensive analysis levels in cases of possible mosaicism, etc. We also satisfactorily participate in aptitude test-like external quality evaluation rounds by the CEQA (Cytogenetic European Quality Assessment).
Regarding fetal chromosomal abnormalities (Table 1), we notice how the common denominator is the indication of an abnormal ultrasound or advanced maternal age along with ultrasound markers suggesting chromosomal abnormalities. Just one case had an enlarged nuchal translucency as the only indication for amniocentesis, and allowed to diagnose a trisomy 21. This atypical situation, was not a free trisomy 21, with 47 chromosomes, but an unbalanced rearrangement trisomy, with 46 chromosomes. This rea(21q21q) is the most common de novo rearrangements in Down Syndrome.6 Conventional cytogenetic analysis doesnt allow to distinguish if this defect is due to a robertsonian translocation or an isochromosome. When this rearrangements are molecularly studied, most of them result to be isochromosomes, derived from a single parental chromosome 21 that undergoes a U-type exchange between sister chromatids.6-8 Another prenatally diagnosed isochromosome was chromosome 18, which produced a 46-chromosome trisomy 18. This case was confirmed with QF-PCR in our laboratory, for this technique has been validated since 2008 for trisomies 21, 18 and 13.9 A third isochromosome for the long arm of the X chromosome, is a relatively frequent finding in cases of mosaic Turner Syndrome with a 45,X typical cell line. Other interesting cases were those that presented structurally abnormal extra chromosomes, also known as markers, supernumerary, accessory and B chromosomes. Some are harmless and without phenotypic consequences (B chromosomes) but others may represent a risk for the fetus. These are diagnosed in 1:1000 prenatal diagnoses, often as mosaics with a normal cell line.10 More than half the time they come from an acrocentric chromosome, which often turns to be a chromosome 15. The case with one marker and severe fetal ascites showed a small additional metacentric chromosome and the malformed fetus had two identical markers, acrocentric with satellites. By the other hand, balanced reciprocal translocations, either maternal or paternal, are common (1:500 carriers) and almost always simple, usually involve just two chromosomes, generally two autosomes and each one has just one split point. Carrier parents have a larger risk of conceiving a physically and mentally abnormal newborn, because of the segmental aneusomy phenomenon.11 For example, in our case of a mother with a (4,7) translocation, a type 1 adjacent imbalance was produced, which presents a trisomic segment for the chromosome 4 portion (q31.1→qter) and another monosomic segment for 7 (q35→qter). There is an 18,40% risk of an abnormal fetus (for any pregnancy) for the mother with this translocation, and this is a potentially viable fetus.
The cytogenetics laboratory always requests a blood sample from both parents to obtain the karyotype, unless it is a free trisomy or a monosomy X. However, we dont always get the hospitals to send us the samples or to refer these patients, so that sometimes the case study remains incomplete. This has implications for future pregnancies, as for appropriate genetic counseling it is necessary to have full information for all cases. Similarly, we request to send information about any discrepancy between the fetal karyotype diagnosed by the laboratory and the newborns phenotype, we even request a neonatal blood sample for internal quality control. Unfortunately we havent received any feedback from any healthcare center in this regard, however, the laboratory has obtained very good results on annually conducted satisfaction surveys.
In Costa Rica,
there are perinatology services equipped with very sophisticated
ultrasound
hardware and highly specialized personnel, so that fetal anatomical
defects and other disorders rarely go unnoticed. Fetal karyotype is an
essential complement
for optimal clinical management of these cases, mostly when
quality-guaranteed
clinical trials are available.
References
Cytogenetics Laboratory, INISA, Universidad de Costa Rica.
*Correspondence: Isabel Castro-Volio
E-mail:isabel.castro@ucr.ac.cr,
Sources of support: Proyecto de cooperación para la acreditación (PROCOA, Cooperation Project for Accreditation). Vicerrectoría de Investigación y Rectoría de la Universidad de Costa Rica (Research Vice Rectory and Rectory of the University of Costa Rica).
Translated by: Javier Estrada ZeledónReceived: May 20th, 2011 Accepted: July 14th, 2011
Fechas de Publicación
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Publicación en esta colección
08 Feb 2012 -
Fecha del número
Dic 2011
Histórico
-
Recibido
20 Mayo 2011 -
Acepto
14 Jul 2011
