Resúmenes

Recolección de células madre en sangre periférica mediante aféresis de grandes volúmenes

Peripheral blood stem cell collection by apheresis

Greivin Zumbado-Salas¹*, Miguel Rodríguez-Pineda²*, Xinia Rojas-Camacho³*, Carlos Rojas-Solano³ y Hever Herrera-Álvarez³

*^{Dirección de correspondencia:}

Antecedentes: evaluar el rendimiento y calidad de las recolecciones de células madre en sangre periférica realizadas en el Hospital México entre junio del 2010 hasta Junio del 2012, dado que existe una dosis mínima de células CD34⁺ (células progenitoras hematopoyéticas) que definen la posibilidad de éxito del injerto en el trasplante de células madre.

Métodos: estudio retrospectivo utilizando los registros de los pacientes y los procedimientos de recolecciones de células madre por aféresis efectuados en el servicio de hematología Hospital México. Para evaluar el rendimiento y calidad de las recolecciones y el efecto de estas en los tiempos de recuperación de los parámetros hematológicos de los pacientes trasplantados entre Junio del 2010 y Junio del 2012.

Resultados: se realizaron 52 procedimientos de aféresis a 26 pacientes (46% Linfoma Hodgkin, 27% Linfoma no Hodgkin, 27% mieloma múltiple). Se procesaron en promedio un total de 8 volemias por paciente con una recolección media de 8.48 x 10⁸ células mononucleares/Kg recolectadas, de las cuales en promedio 3.06 x 10⁶/kg corresponde a células CD34⁺. El tiempo promedio de recuperación para los parámetros hematológicos por paciente fue de 15.05 días para leucocitos y ⁺ infundidas y el tiempo de recuperación de las plaquetas, no así para los leucocitos.

Conclusiones: los recuentos obtenidos para las recolecciones estuvieron dentro de los valores descritos en otras publicaciones, lo mismo que los tiempos de recuperación de los parámetros hematológicos post infusión, por lo que el protocolo utilizado ha mostrado ser exitoso. Solo el recuento de leucocitos pre recolección mostró ser de utilidad para predecir una buena recolección, además el recuento de células CD34⁺ infundidas al paciente es el mejor parámetro para predecir una buena implantación del injerto.

Descriptores: células madre, células CD34⁺, aféresis, recolecciones.

Abstract

Background: To evaluate performance and quality of peripheral blood stem cell collections performed at the MéxicoHospital from June 2010 to June 2012, since there is an established minimum dose of CD34⁺ cells that determines the probability of success of engraftment.

Methods: A retrospective study using patient records and data obtained from peripheral blood stem cell apheresis procedures carried out at the Haematology Unit of the MéxicoHospital. This information was used to calculate performance and quality values of collections, and the effect of these on the recovery time of haematological parameters in patients transplanted between June 2010 and June 2012.

Results: A total of 52 peripheral blood stem cell apheresis procedures were performed to 26 patients (Hodgkin lymphoma 46%, non-Hodgkin lymphoma and multiple myeloma 27%). An average of 8 blood volumes per patient was processed, the median collection was 8.48 x10⁸ mononuclear cells/Kg, of which an average of 3.06 x10⁶/Kg were CD34⁺ cells. The average recovery time of haematological parameters after transplant was 15.05 days for leukocytes and 17.15 days for platelets. An inverse correlation was observed between CD34⁺ infused cell count and time for platelet count recovery, but not for leukocyte count recovery.

Conclusions: Cell counts obtained from apheresis collections and recovery time of haematological parameters after transplant were consistent with results described by the medical literature, showing that the protocol followed has been successful. Only leukocyte count previous to apheresis has proved to be useful to predict a quality collection, and CD34⁺ infused cell count is the best parameter to predict a successful engraftment.

Keywords: stem cells, CD34⁺ cells, apheresis, collection.

²,^6,7

²

⁶,⁸

¹,²,⁷,¹¹

2012, a pacientes del Servicio de Hematología del Hospital México, con el fin de realizar trasplantes autólogos de médula ósea.

Movilización y acceso vascular: en todos los pacientes la movilización se realizó con G-CSF 5 µg/kg/día subcutáneo, durante 5 días previos a la recolección; las recolecciones se llevaron a cabo los días 6 y 7. El día previo a la recolección con el paciente ya internado, se le colocó el acceso vascular, el cual fue en todos los casos un catéter central, casi siempre femoral.

Recolección de células progenitoras hematopoyéticas en sangre periférica: todas las recolecciones se realizaron en la Unidad de Trasplante de Células Madre Hematopoyéticas del Hospital México, en condiciones estrictamente controladas por personal entrenado para estos fines, y bajo monitoreo continuo de los signos vitales del donante. En todos los casos el donante se encontraba consciente y orientado, sin ningún tipo de sedación. Las recolecciones se realizaron con el equipo COBE Spectra (Caridian BTC, Denver, CO, USA), con el descartable para leucaferesis en el programa para recolección de células mononucleares. Se utilizó ACD como anticoagulante con 1000 unidades de heparina para trabajar a una proporción de 24:1, el hematocrito de recolección se estableció mediante el colorgrama entre el 1% y el 2%. El objetivo era procesar al menos 3 volemias por procedimiento.

Parámetros hematológicos y de calidad: en los procedimientos se recopilaron los datos necesarios para realizar la recolección: peso, talla, volemia, conteo de leucocitos antes del procedimiento y hematocrito. Al final se cronometró el tiempo del procedimiento, se tomaron muestras de la recolección para recuento de leucocitos, células mononucleares, viabilidad, cultivo, y se envió una muestra al laboratorio de investigación del Hospital Nacional de Niños, para determinar por medio de citometría de flujo, la cantidad de células CD34⁺ recolectadas.

⁺ por recolección, recuento de células mononucleares/ kg del paciente por recolección y por cosecha (la suma de todas las recolecciones realizadas) y CD34⁺/Kg del paciente por recolección y por cosecha.

⁵,¹³

⁶ células CD 34⁺ por kilogramo de peso del paciente, por cosecha.

^{Cuadro 1}.

⁶ 0,13 8,32 1,53 procedimiento duró en promedio 250,7 minutos, durante los cuales se procesaron aproximadamente 17972ml por paciente, lo que permitió recolectar alrededor de 235,9 ml en cada aféresis, y obtener en este volumen, en promedio, 4,24 x10⁸ células mononucleares/Kg de peso del paciente, entre las cuales 1,53x10⁶ corresponden a células CD 34⁺ (^{Cuadro 1}).

⁺/Kg y la cantidad de leucocitos del paciente antes de la recolección (leucocitos post estimulación) p=0,028; además, se observó asociación entre el recuento de CD34⁺/kg y los leucocitos x10³ recolectados, y los mononucleares/kg x10⁸ recolectados (p< 0,05). Las demás variables estudiadas no mostraron tener una relación directa sobre el rendimiento de las recolecciones de células CD34 positivas (p ≥ 0,05).

⁺/kg, únicamente el recuento de leucocitos postestimulación puede ser utilizado como un predictor de la eficacia de la recolección, ya que los otros 2 parámetros son parte del resultado final y solo sirven para estimar el conteo de CD34+ luego de la recolección.

⁸células mononucleares/Kg de peso, de las cuales, en promedio, 3,06 x 10⁶/kg corresponden a células CD34 positivas.

^{Cuadro 3}, se pueden observar leves diferencias en cuanto al rendimiento, pero estas no son significativas al comparar los grupos mediante una prueba de t (p> 0,05), por lo que el diagnóstico no influye en el rendimiento de las recolecciones, aunque se debe destacar que las poblaciones son pequeñas y de tamaños muy diferentes.

^{Cuadro 4} se resume la información respecto a los días necesarios para recuperar los valores aceptables de leucocitos y plaquetas en ese periodo, según el rendimiento de las recolecciones.

⁺ infundidas influye en el tiempo de recuperación en alguno de estos parámetros evaluados, se obtiene una correlación directa entre el tiempo de recuperación de plaquetas y el conteo de CD34+/ kg de peso presentes en la recolección (p= 0,043), lo que no se repitió en el caso de la recuperación de leucocitos (p>0,05).

¹,⁴,¹⁴En el estudio se cumplen estos parámetros, exceptuando la determinación de las células CD 34⁺ en sangre periférica antes del procedimiento, ya que hasta ese momento no está disponible. Otros parámetros que pueden afectar el rendimiento en las recolecciones de células madre de sangre periférica, van desde los métodos para la movilización de las células madre, hasta el equipo por utilizar y el protocolo de la recolección. Dentro de este último se incluye otra serie de factores de importancia en el desempeño por obtener. Muchos autores difieren en cuanto a los protocolos adecuados y a los rendimientos mínimos necesarios en estos procedimientos, pero en lo que la mayoría está de acuerdo es en que cada centro médico debe establecer sus propios protocolos, con los parámetros que les ofrezcan el mejor rendimiento.

²,⁷Sin embargo, la dosis adecuada de células madre necesarias para minimizar el tiempo entre la infusión y la recuperación de los parámetros celulares en sangre periférica, permanecen aún sujeta a debate.

⁶ CD34+/kg por cosecha, en promedio, valor que se encuentra entre los parámetros establecidos por la mayoría de centros médicos a nivel internacional, pero cuya utilidad en la práctica solo se puede observar al evaluar la recuperación postrasplante de los pacientes infundidos con estas células. Además, entre las variables analizadas en el estudio, únicamente el recuento de leucocitos prerecolección mostró ser un buen indicador para una recolección exitosa (P=0,028). Estudios anteriores hacen una correlación similar entre la dosis final de CD 34⁺/kg y el recuento de leucocitos prerecolección, pero esta se invierte cuando los recuentos de leucocitos son superiores a 35000 células por µl, postulando que un exceso de leucocitos puede crear una banda de separación de células mononucleares que sobrepasa el diámetro del canal de recolección, incrementando el escape de células mononucleares y, por ende, de CD 34⁺, afectando la eficiencia de la cosecha;¹,¹⁴aunque tal situación no se presentó en el estudio, se debe tener en cuenta que, en promedio, los recuentos de leucocitos prerecolecta fueron de 30706/µL.

Figuerres y cols.,¹³ en un estudio con pacientes pediátricos, no hallaron correlación entre los recuentos de CD34+/kg infundidos o células mononucleares infundidas, y el tiempo de recuperación de leucocitos y plaquetas, a diferencia de Weaver y cols.,¹⁵cuya correlación entre el número de CD34+/kg infundidas y el tiempo de recuperación en los niveles de plaquetas y leucocitos, sí fue significativa. En el estudio el parámetro que tardó más en recuperarse fue el de las plaquetas, con un promedio de 17,15 días, y por ende, este es el promedio de recuperación final en días de los pacientes, y aunque no se demuestra una correlación entre el recuento de células CD34+/ kg infundidas y el tiempo de recuperación de los leucocitos (p>0,05), sí se encontró una correlación significativa entre este recuento y el tiempo de recuperación de las plaquetas (p= 0,043).

⁺ prerecolección, dato que se incorporará pronto en el protocolo.

Referencias bibliográficas

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